Clinical features of the microRNA genes methylation in borderline ovarian tumors and depending on the histological structure in ovarian malignancies

Full Text

К пограничным опухолям яичников (ПОЯ), также известным как атипически пролиферирующие опухоли, относят новообразования, которые характеризуются атипичной эпителиальной пролиферацией и не имеют инвазии в строму. Данный тип опухоли в большинстве случаев имеет благоприятный прогноз и редко склонен к злокачественной трансформации [1, 2]. Из всех эпителиальных новообразований яичников на ПОЯ приходится 15–20%. К наиболее распространенным типам ПОЯ относятся серозные (53%) и муцинозные (43%). Другие типы, в том числе пограничные эндометриоидные, светлоклеточные и опухоли Бреннера, обнаруживают лишь в 4% наблюдений [3]. Серозные ПОЯ имеют общие молекулярные и генетические черты с серозными карциномами низкой степени злокачественности и могут присутствовать на более тяжелых стадиях рака с перитонеальными имплантатами и/или поражением лимфатических узлов, что подтверждает их злокачественный потенциал. ПОЯ так называемых несерозных гистологических типов, к которым относятся муцинозные, эндометриоидные, светлоклеточные и Бреннера, обычно характеризуются односторонней локализацией без имплантации в перитонеальное пространство и благоприятным прогнозом [2–4].

К настоящему времени накоплена обширная информация о влиянии аномальной экспрессии микроРНК (миРНК) на развитие и прогрессию рака яичников. Однако имеются ограниченные данные о дифференциальном паттерне этой экспрессии, связанном с гистологическими типами рака яичников, и единичные сообщения о паттерне экспрессии миРНК и в доброкачественных опухолях яичников, и в пограничных [5–7]. Так, миРНК, специфичные для ПОЯ, были наиболее подробно изучены в работе [5], где экспрессия 4 миРНК (miR-30c, miR-30d, miR-30e-3p, miR-370) значительно различалась между карциномами и доброкачественными опухолями яичников, а также между карциномой и пограничными опухолями. Еще 3 миРНК (miR-181d, miR-30a-3p, miR-532-5p) значительно различались только между ПОЯ и карциномами. Экспрессия miR-532-5p была существенно ниже в пограничных опухолях, чем в доброкачественных. Среди карцином яичников экспрессия 4 миРНК (miR-30a-3p, miR-30c, miR-30d, miR-30e-3p) была самой низкой в муцинозной и самой высокой в образцах светлоклеточной карциномы. В работе [8] обнаружено, что экспрессия miR-106b, напротив, значительно выше в нормальных тканях яичников и доброкачественных опухолях, чем в карциномах яичников и пограничных опухолях (p < 0,01). Коллективом авторов [9] проведен анализ экзосомных миРНК в сыворотке 68 новообразований яичников, включая доброкачественные кисты яичников (n = 10), ПОЯ (n = 10), серозные карциномы яичников высокой (n = 39) и низкой (n = 9) степени дифференцировки, что позволило отобрать экзосомные миРНК miR-93, miR-145 и miR-200c со значимо повышенным уровнем экспрессии в сыворотке больных раком яичников. Сывороточные экзосомальные miR-145 и miR-200c отобраны как биомаркеры для предоперационной диагностики карцином яичников [9].

Отмечено, что промоторные CpG-островки генов миРНК аберрантно метилируются, подобно генам, кодирующим белок, и что процент генов, дерегулируемых с помощью аберрантного метилирования, значительно выше среди первых генов, чем среди вторых [10]. Ранее нами показана высокая эффективность анализа метилирования генов миРНК для оценки степени развития и прогрессии рака яичников и определены наборы маркеров для диагностики и прогноза рака яичников [11–13]. В данной работе впервые проведен поиск аберрантно метилированных генов миРНК, специфичных для ПОЯ и некоторых гистологических подтипов рака яичников. Скрининг биомаркеров ПОЯ выполнен среди 21 гена миРНК.

Материал и методы

Клинический материал

Образцы рака яичников собраны и морфологически охарактеризованы в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. В исследование включено 93 больных злокачественными опухолями яичников (ЗОЯ) в возрасте 25–81 года, а также 6 больных ПОЯ в возрасте 14–39 лет, проходивших обследование и лечение в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России в период с 1995 по 2019 г. Использовали материал от пациенток, которые до операции не получали лучевую, химио- или гормонотерапию. Диагноз установлен на основании гистологического заключения. В качестве контроля взяты образцы ткани яичников 15 женщин, умерших без признаков онкологических заболеваний по данным анамнеза.

Исследование выполнено в соответствии с этическими нормами Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964, 2004), все пациенты подписали информированное добровольное согласие. Все опухоли яичников классифицированы в соответствии с TNM-классификацией Международного противоракового союза и гистологически верифицированы на основании критериев классификации Всемирной организации здравоохранения [14]. Исследование выполнено по международным правилам работы с биоматериалом людей. ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии» получено соглашение от 20.01.2020 № 20/1 о взаимном сотрудничестве с ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России.

В табл. 1 приведены количественные данные по гистологическому составу ЗОЯ всех исследованных образцов. Для отбора образцов с высоким содержанием опухолевых клеток (не менее 70–80%) проводили дополнительный гистологический анализ микросрезов (3–5 мкм), окрашенных гематоксилином и эозином. Образцы тканей хранили при -70 °С.

 

Таблица 1. Распределение больных злокачественными опухолями яичников в зависимости от гистологического варианта строения опухоли

Гистологический вариант	Частота, абс. (%)
Серозная аденокарцинома	44 (47,3)
Серозная цистаденокарцинома	38 (40,9)
Муцинозная цистаденокарцинома	1 (1,0)
Эндометриоидная аденокарцинома	10 (10,8)

 

Методы

Полученные в ходе биопсии или оперативного вмешательства образцы объемом до 100 мм³ измельчали с использованием гомогенизатора-диспергатора Ultra-Turrax T10 basic (IKA, Германия). Высокомолекулярную ДНК выделяли из ткани по стандартной методике с применением фенол-хлороформной экстракции. Качество и концентрацию ДНК определяли по оптической плотности на спектрофотометре NanoDrop ND-1000 (Thermo Fisher Scientific, США). Уровень метилирования генов миРНК анализировали методом количественной метилспецифичной полимеразной цепной реакции с детекцией в реальном времени с применением бисульфитной конверсии ДНК (0,5‒2,0 мкг), как описано в работах [15–18]. Набор реактивов qPCRmix-HS SYBR («Евроген», Россия) использовали в соответствии с рекомендациями производителя. Амплификацию проводили в системе CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad, США) по протоколу производителя. Последовательности олигонуклеотидов и условия проведения полимеразной цепной реакции для исследованных генов миРНК взяты из работ [12, 16, 19]. Полноту конверсии ДНК определяли с помощью контрольного локуса гена ACTB с применением олигонуклеотидов, специфичных к неконвертированной матрице [16]. В качестве контролей для неметилированных аллелей использовали коммерческий препарат ДНК #G1471 (Promega, США). В качестве положительного контроля 100%-го метилирования применяли коммерческий препарат ДНК #SD1131 (Thermo Fisher Scientific).

Для статистической обработки полученных данных использовали программы IBM SPSS Statistics 22 и STATISTICA 10. Она включала определение медианы (Ме), интерквартильного размаха [Q1; Q3] и минимального и максимального значений (min–max). Для оценки статистической значимости различий применялись непараметрические критерии Манна – Уитни и Краскела – Уоллиса. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Результаты и обсуждение

Гены микроРНК, специфично гиперметилированные в пограничных опухолях яичников

В табл. 2 обобщены результаты анализа метилирования 21 гена миРНК в образцах ПОЯ, ЗОЯ и группы контроля. Оказалось, что уровни метилирования 8 генов миРНК, а именно MIR124-2, MIR124-3, MIR127, MIR137, MIR375, MIR9-1, MIR9-3, MIR130B, были выше в группе ЗОЯ в сравнении с группой ПОЯ и группой контроля (рис. 1). Интересно, что значения медиан 6 других генов – MIR129-2, MIR132, MIR148A, MIR203, MIR107 и MIR1258 – были, наоборот, выше в группе ПОЯ, чем ЗОЯ (см. табл. 2). При этом различия в уровнях метилирования гена MIR148A в группах ПОЯ и ЗОЯ статистически значимы (p = 0,047, рис. 2, см. табл. 2), а в группах больных ЗОЯ и контроля – незначимы (7,9 против 5,0). На основании этих данных можно предположить специфическую роль гена MIR148A в развитии ПОЯ.

 

Таблица 2. Данные анализа метилирования генов микроРНК в образцах ткани яичников разных групп больных и группы контроля

Ген MIR	Метилирование в ткани яичников, Ме [Q1; Q3], min–max, %			Значение p* (FDR = 0,01)
	Контроль (n = 15)	Ткань опухоли яичников
		ПОЯ (n = 6)	ЗОЯ (n = 93)
124-1	0,5 [0, 2; 3, 1], 0,1–9,2	14,0 [8, 9; 24, 0], 8,8–45,0	10,0 [2, 6; 21, 6], 0–67,3	p0–2 < 0,0001 p0–1 = 0,003
124-2	7,4 [0, 2; 13, 1], 0,1–19,5	19,0 [11, 0; 36, 5], 6,4–92,3	29,0 [6, 8; 51, 7], 0–98,1	p0–2 = 0,0017
124-3	4,7 [0, 3; 8, 9], 0,1–17,8	16,8 [12, 7; 30, 9], 9,6–34,6	21,4 [8, 5; 41, 7], 0,04–95,3	p0–2 < 0,0001
125B-1	5,6 [1, 6; 11, 4], 1,1–16,2	36,6 [1, 5; 75, 1], 0,4–97,3	34,8 [11, 2; 60, 6], 0,1–99,3	p0–2 < 0,0001
127	8,8 [0, 9; 11, 1]; 0,2–18,8	12,7 [1, 6; 20, 4], 1,0–31,0	27,6 [4, 8; 53, 9], 0,08–93,3	p0–2 < 0,001
129-2**	8,2 [4, 9; 11, 2], 4,3–13,3	51,6 [12, 7; 87, 4], 2,1–89,0	31,2 [10, 3; 51, 5], 0,3–99,3	p0–2 < 0,001 p0–1 = 0,036
132**	1,3 [0, 1; 4, 3], 0,1–9,0	25,6 [7, 6; 47, 2], 0,2–62,5	9,8 [3, 6; 31, 9], 0,05–98,8	p0–2 < 0,0001 p0–1 = 0,008
137	7,5 [2, 9; 10, 0], 0,3–13,2	22,9 [1, 8–76, 7], 1,0–90,0	31,1 [2, 5; 56, 9], 0–98,5	p0–2 = 0,018
148A**	5,0 [3, 0; 10, 9], 0,1–13,6	31,3 [25, 0; 50, 0], 9,9–90,8	7,9 [1, 9; 28, 7], 0–94,4	p0–1 = 0,018 p1–2 = 0,047
191	28,5 [13, 8; 32, 9], 8,6–94,4	4,8 [1, 8; 22, 2], 1,7–33,8	7,0 [2, 4; 25, 8], 0,01–90,7	p0–2 = 0,006
193A	4,5 [0, 3; 7, 3], 0,1–12,2	32,1 [8, 5; 38, 3], 0,1–53,1	34,8 [15, 4; 56, 4], 0,1–98,4	p0–2 < 0,0001
203**	6,9 [0, 9; 9, 9], 0,1–15,2	13,8 [0, 6; 74, 5], 0,2–90,9	6,8 [1, 3; 35, 3], 0,01–98,2	–
212	4,6 [1, 6; 8, 3], 0,2–13,9	5,9 [0, 4; 17, 8], 0,03–70,5	4,8 [1, 5; 12, 6], 0,02–98,2	–
34B/C	0,9 [0, 4; 1, 7], 0,1–7,7	21,3 [11, 4; 27, 4], 3,7–76,2	17,6 [3, 1; 35, 4], 0,01–98,1	p0–2 < 0,0001 p0–1 = 0,005
375	1,0 [0, 2; 2, 8], 0,1–9,1	7,8 [2, 2; 15, 0], 0,01–28,2	10,9 [3, 2; 34, 2], 0–92,5	p0–2 < 0,001
9-1	2,0 [1, 4; 4, 0], 0,1–8,8	7,3 [4, 0; 10, 0], 0,05–94,6	24,4 [7, 7; 56, 3], 0,01–93,6	p0–2 < 0,0001
9-3	7,4 [5, 2; 14, 9], 0–18,0	10,7 [5, 4; 24, 8], 2,1–36,5	21,9 [7, 2; 36, 4], 0,02–98,3	p0–2 = 0,014
130B	1,6 [0, 3; 2, 9], 0–7,2	7,8 [1, 6; 28, 2], 1,4–91,4	16,9 [6, 8; 32, 5], 0,1–99,1	p0–2 < 0,0001
107**	7,2 [2, 4; 10, 2], 1,6–17,4	26,1 [18, 2; 31, 1], 3,5–92,3	15,7 [6, 2; 53, 5], 0–93,0	p0–2 = 0,024
1258**	1,0 [0, 3; 12, 2], 0,2–14,1	35,6 [17, 0; 62, 2], 4,2–70,2	11,2 [4, 4; 40, 8], 0,1–90,8	p0–2 < 0,001 p0–1 = 0,002
339	7,9 [3, 2; 9, 4], 1,2–11,8	23,6 [9, 2; 48, 1], 8,2–99,9	21,2 [8, 2; 54, 3], 0,2–99,7	p0–2 < 0,001 p0–1 = 0,009

FDR – false discovery rate, ожидаемая доля ложных отклонений, ЗОЯ – злокачественные опухоли яичников; ПОЯ – пограничные опухоли яичников

p_0–1 – различия между группой контроля и группой больных ПОЯ, p_0–2 – различия между группой контроля и группой больных ЗОЯ, p_1–2 – различия между группой больных ПОЯ и группой больных ЗОЯ

^* Представлены только статистически значимые различия

^** Гены, у которых значения медиан существенно выше в ПОЯ, чем в ЗОЯ

 

Рис. 1. Медианы уровней метилирования 8 генов миРНК в группе больных злокачественными опухолями яичников (ЗОЯ) в сравнении с больными с пограничными опухолями яичников (ПОЯ) и группой контроля

 

Рис. 2. Уровни метилирования гена MIR148A в ткани яичников в группе контроля (0), группе больных пограничными опухолями яичников (1) и группе больных злокачественными опухолями яичников (2)

 

При сравнении группы контроля и больных ПОЯ статистически значимые различия установлены для 7 из 21 изучаемого гена (р < 0,05, рис. 3). Отметим: 10 генов миРНК (MIR124-1, MIR125B-1, MIR129-2, MIR132, MIR148A, MIR193A, MIR203A, MIR107, MIR1258, MIR339) характеризовались высоким уровнем метилирования в опухолях больных ПОЯ в сравнении с тканями яичников здоровых женщин, в отсутствие значимого изменения в группе больных ЗОЯ (рис. 4).

 

Рис. 3. Медианы и квартили уровней метилирования ряда генов в группе контроля (0) и группе больных пограничными опухолями яичников (1)

 

Рис. 4. Повышенные уровни метилирования 10 генов миРНК в группе больных пограничными опухолями яичников (ПОЯ) в сравнении как с группой контроля, так и с группой больных злокачественными опухолями яичников (ЗОЯ) (кроме MIR193А)

 

Наиболее существенное повышение (в 1,5–4 раза) уровня метилирования в образцах больных ПОЯ в сравнении с образцами больных ЗОЯ отмечено для 6 генов миРНК: MIR129-2, MIR132, MIR148A, MIR203, MIR107 и MIR1258 (см. табл. 2, рис. 4), что указывает на специфичную вовлеченность этих миРНК в патогенез ПОЯ. Повышенное метилирование данных супрессорных генов снижает их экспрессию и может увеличивать злокачественный потенциал ПОЯ.

Подобные попытки изучения статуса метилирования предпринимались и ранее при исследовании белок-кодирующих генов при раке яичников [20–22]. При этом существенных различий в статусе метилирования генов, кодирующих белки, в группах ПОЯ и ЗОЯ выявлено не было. Вместе с тем на данный момент нет ни одной публикации, в которой выполнен количественный анализ уровня метилирования миРНК в группах ПОЯ и ЗОЯ (поиск велся по базе PubMed, дата обращения: 14.10.2021). Наши результаты, свидетельствующие о существенно повышенном метилировании 6 генов миРНК (MIR129-2, MIR132, MIR148A, MIR203, MIR107 и MIR1258, при этом различия в уровнях метилирования гена MIR148A статистически значимы) в группе ПОЯ, получены впервые. Таким образом, нами выявлены новые эпигенетические факторы, которые могут оказывать влияние на развитие и степень злокачественности ПОЯ и служить их биомаркерами. Обнаруженные нами новые эпигенетические регуляторные факторы и биомаркеры ПОЯ могут найти применение для целей диагностики и профилактики рака яичников. Эти данные могут быть использованы в клинике как критерии течения болезни и, как следствие, для изменения тактики лечения.

Сравнение уровней метилирования генов миРНК в злокачественных опухолях яичников в зависимости от гистологического типа опухоли

Проведено сравнение уровней метилирования 21 гена миРНК в опухолях яичников 4 гистологических типов: серозная аденокарцинома, серозная цистаденокарцинома, муцинозная цистаденокарцинома и эндометриоидная аденокарцинома (табл. 3).

 

Таблица 3. Метилирование группы генов миРНК в образцах злокачественных опухолей яичников в зависимости от гистологического варианта строения опухоли

Ген MIR	Метилирование в опухолевой ткани яичников, Ме [Q1; Q3], %
	Гистологический вариант строения опухоли
	САК (n = 44)	СЦАК (n = 38)	ЭАК (n = 10)	МЦАК (n = 1)
124-1	11,4 [3, 3; 21, 0]	10,0 [2, 6; 30, 0]	3,8 [0, 4; 21, 2]	2,1
124-2	42,0 [7, 2; 66, 7]	21,2 [6, 8; 37, 2]	11,7 [3, 0; 41, 2]	0
124-3	21,3 [11, 9; 35, 8]	18,8 [4, 8; 50, 3]	28,8 [8, 6; 39, 8]	52,7
125B-1	32,8 [11, 2; 57, 6]	35,5 [13, 0; 69, 1]	33,4 [11, 2; 85, 0]	7,1
127	35,9 [5, 1; 56, 1]	18,8 [3, 9; 45, 0]	34,5 [18, 2; 45, 1]	54,3
129-2	32,1 [7, 6; 46, 6]	39,4 [12, 5; 84, 3]	23,0 [15, 2; 31, 2]	2,9
132	9,4 [4, 5; 16, 9]	11,5 [3, 6; 57, 3]	11,7 [1, 9; 35, 3]	0,1
137	36,6 [8, 0; 53, 1]	33,3 [2, 0; 60, 1]	12,7 [1, 0; 64, 4]	2,3
148A*	11,4 [5, 9; 34, 9]	2,4 [1, 1; 10, 1]	30,4 [7, 2; 45, 8]	1,9
191*	14,7 [4, 9; 28, 8]	2,4 [0, 7; 7, 0]	32,0 [11, 2; 42, 0]	21,3
193A	27,6 [14, 5; 54, 3]	42,3 [9, 0; 59, 7]	38,7 [24, 9; 66, 4]	34,6
203А	6,1 [0, 9; 33, 7]	10,3 [2, 6; 40, 9]	3,0 [1, 0; 37, 6]	1,3
212	8,7 [1, 6; 13, 6]	2,9 [1, 1; 7, 4]	9,5 [0, 5; 31, 1]	2,6
34B/C	12,7 [3, 8; 29, 8]	23,1 [2, 3; 49, 2]	11,2 [1, 3; 15, 7]	31,3
375	9,8 [0, 5; 36, 7]	11,3 [4, 3; 37, 6]	10,8 [8, 1; 18, 0]	1,6
9-1	25,6 [10, 6; 53, 8]	38,2 [3, 0; 63, 6]	20,0 [2, 2; 24, 2]	2,0
9-3**	15,8 [5, 9; 23, 9]	31,3 [13, 5; 52, 2]	16,0 [4, 6; 45, 1]	3,1
130B	16,1 [7, 3; 23, 9]	22,2 [6, 8; 48, 2]	15,1 [4, 5; 39, 0]	1,9
107	10,5 [5, 8; 56, 9]	22,2 [6, 2; 44, 5]	26,3 [8, 3; 59, 2]	2,7
1258**	8,2 [3, 9; 27, 2]	25,1 [7, 1; 56, 2]	5,0 [3, 5; 8, 0]	27,2
339	18,7 [2, 7; 49, 3]	21,1 [11, 2; 59, 1]	22,0 [12, 0; 26, 5]	44,6

МЦАК – муцинозная цистаденокарцинома, САК – серозная аденокарцинома, СЦАК – серозная цистаденокарцинома, ЭАК – эндометриоидная аденокарцинома

^* p < 0,001, FDR (false discovery rate, ожидаемая доля ложных отклонений) = 0,01

^** p < 0,05, FDR (false discovery rate, ожидаемая доля ложных отклонений) = 0,01

 

Наша выборка образцов представлена в основном серозной аденокарциномой (44 образца, 47,3%) и серозной цистаденокарциномой (38 образцов, 40,9%), которые составляют в сумме 82% исследованных ЗОЯ. Другие гистотипы присутствуют в меньшем количестве. Метилирование большинства генов распределено случайным образом между четырьмя гистологическими типами ЗОЯ, однако метилирование двух генов миРНК – MIR148A и MIR191 – имеет особенности и значимо связано со специфичными гистологическими вариантами рака яичников. Так, уровень метилирования гена MIR148A в группе больных серозной цистаденокарциномой статистически значимо меньше (2,4%) по сравнению как с вариантом серозной аденокарциномы (11,4%, р = 0,0003), так и с вариантом эндометриоидной аденокарциномы (30,4%, р = 0,0011, рис. 5). Аналогичная закономерность получена и при сравнении медиан метилирования гена MIR191. Так, в группе больных с вариантом серозной цистаденокарциномы медиана метилирования была статистически значимо меньше (2,4%) по сравнению с группами пациенток как с серозной аденокарциномой (14,7%, р = 0,0002), так и с эндометриоидной аденокарциномой (32%, р = 0,0003, см. рис. 5). У этих двух генов – MIR148A и MIR191 – втрое возрастает уровень метилирования у больных эндометриоидной аденокарциномой (приблизительно от 10 до 30%).

 

Рис. 5. Медианы метилирования генов микроРНК в ткани опухоли больных раком яичников, значимо связанных с гистологическим вариантом строения опухоли; САК – серозная аденокарцинома, СЦАК – серозная цистаденокарцинома, ЭАК – эндометриоидная аденокарцинома

 

Ген MIR191 подвергается в ЗОЯ деметилированию, то есть проявляет онкогенные свойства, что принципиально отличает его от остальных исследованных нами генов миРНК, гиперметилированных в ЗОЯ.

На основании наших результатов, в том числе особенностей, выявленных для гена MIR148A, можно предположить его двойственную природу. Под этим следует понимать тканеспецифичность данного гена и его способность быть как онкогеном, провоцируя развитие опухоли, так и супрессором, соответственно, подавляя ее. В этом свете интересной представляется роль метилирования как механизма дерегуляции данной миРНК, который может обусловливать ее двойственную природу.

Интересно отметить, что у гена MIR148A выше уровень метилирования у больных с серозной и эндометриоидной аденокарциномой, но этот ген значимо деметилирован в опухолях больных с серозной цистаденокарциномой. При этом именно ген MIR148A показал статистически значимо более высокий уровень метилирования в ПОЯ. Ранее для этого гена нами также выявлено резкое повышение метилирования при колонизации вторичных опухолей, перитонеальных макроскопических метастазов рака яичников [23]. Как известно, в процессах метастазирования наибольшее значение имеет эпителиально-мезенхимальный переход. Однако при закреплении метастатических клеток в метастатической нише может происходить обратный мезенхимально-эпителиальный переход. Эти переходы могут быть обратимы, и наибольшая пластичность отмечена при метастазировании именно рака яичников [24, 25].

В свете представленных здесь результатов важно, что в регуляции процессов обратимых эпителиально-мезенхимального – мезенхимально-эпителиального переходов и их пластичности ключевая роль отводится эпигенетическим факторам [26, 27]. При этом среди данных факторов важное значение в регуляции биологических процессов, связанных с перепрограммированием клеток опухолей яичников, могут иметь некодирующие РНК, в частности миРНК, и метилирование генов миРНК [12, 28]. С этой концепцией согласуется и открытый нами недавно эффект снижения гиперметилирования ряда генов длинных некодирующих РНК в перитонеальных макроскопических метастазах рака яичников, что также указывает на значение аберрантного метилирования длинных некодирующих РНК как эпигенетического фактора в реверсии эпителиально-мезенхимальный – мезенхимально-эпителиальный переходы при колонизации метастазов рака яичников в брюшине [29].

Обнаруженные в данной работе гиперметилирование генов миРНК в группе ПОЯ и различия уровней метилирования генов миРНК в гистологических вариантах ЗОЯ также указывают на потенциальную регуляторную роль эпигенетических факторов в биологических процессах, определяющих перепрограммирование клеток яичников, а также на вовлеченность метилирования ряда генов миРНК в клинические проявления ПОЯ и гистологические варианты ЗОЯ.

Заключение

В данной работе впервые выявлены ассоциации метилирования генов MIR148A и MIR191 со специфичными гистологическими вариантами рака яичников. Для группы генов миРНК, включая MIR148A, установлено повышение метилирования у больных ПОЯ в сравнении как со здоровыми женщинами, так и с больными ЗОЯ. В целом полученные результаты подтверждают регуляторную роль эпигенетических факторов в процессах формирования различных клинических фенотипов рака яичников.

Дополнительная информация

Финансирование

Работа выполнена за счет финансирования Российским научным фондом, грант № 20-15-00368.

Конфликт интересов

Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Участие авторов

С.С. Лукина – проведение экспериментальных исследований; А.М. Бурденный – дизайн экспериментальной части исследования, анализ результатов, написание, редактирование и утверждение итогового варианта текста; Е.А. Филиппова – статистическая обработка данных, проведение экспериментальных исследований; И.В. Пронина – проведение экспериментальных исследований; Т.П. Казубская, Д.Н. Кушлинский и Д.О. Уткин – сбор и обработка материала; Э.А. Брага – концепция и дизайн исследования, написание, редактирование и утверждение итогового варианта текста; В.И. Логинов – анализ результатов, написание, редактирование и утверждение итогового варианта текста; Н.Е. Кушлинский – концепция статьи, анализ клинико-экспериментальных результатов исследования. Все авторы прочли и одобрили финальную версию статьи перед публикацией, согласны нести ответственность за все аспекты работы и гарантируют, что ими надлежащим образом были рассмотрены и решены вопросы, связанные с точностью и добросовестностью всех частей работы.

About the authors

Svetlana S. Lukina

Institute of General Pathology and Pathophysiology

Email: sveta_sergeevna349@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6246-2444

Research Fellow, Laboratory of Pathogenomics and Transcriptomics

Россия, 8 Baltiyskaya ul., Moscow, 125315

Alexey M. Burdennyy

Institute of General Pathology and Pathophysiology

Email: burdennyy@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-9398-8075

PhD (in Biol.), Leading Research Fellow, Laboratory of Pathogenomics and Transcriptomics

Россия, 8 Baltiyskaya ul., Moscow, 125315

Elena A. Filippova

Institute of General Pathology and Pathophysiology

Email: p.lenyxa@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-7172-0433

MD, PhD, Research Fellow, Laboratory of Pathogenomics and Transcriptomics

Россия, 8 Baltiyskaya ul., Moscow, 125315

Irina V. Pronina

Institute of General Pathology and Pathophysiology

Email: zolly_sten@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0423-7801

PhD (in Biol.), Senior Research Fellow, Laboratory of Pathogenomics and Transcriptomics

Россия, 8 Baltiyskaya ul., Moscow, 125315,

Tatiana P. Kazubskaya

N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology

Email: oncogen5@ronc.ru
ORCID iD: 0000-0001-5856-0017

MD, PhD, Oncogeneticist, Senior Research Fellow, Laboratory of Clinical Oncogenetics

Россия, 23 Kashirskoe shosse, Moscow, 115478

Dmitry N. Kushlinsky

N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology

Email: biochimia@yandex.ru

Oncologist, Laboratory of Clinical Biochemistry and Laboratorial Diagnostics

Россия, 23 Kashirskoe shosse, Moscow, 115478

Dmitriy O. Utkin

Moscow Municipal Oncological Hospital No. 62

Email: burdennyy@gmail.com

Surgeon, Department of Gynaecological Oncology

Россия, 27 Istra poselok, Krasnogorskiy rayon, 143423, Russian Federation

Eleonora A. Braga

Institute of General Pathology and Pathophysiology

Author for correspondence.
Email: eleonora10_45@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5188-4094

Doctor of Biol. Sci., Professor, Chief Research Fellow, Head of Laboratory of Pathogenomics and Transcriptomics

Россия, 8 Baltiyskaya ul., Moscow, 125315

Vitaly I. Loginov

Institute of General Pathology and Pathophysiology

Email: loginov7w@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-2668-8096

PhD (in Biol.), Leading Research Fellow, Laboratory of Pathogenomics and Transcriptomics

Россия, 8 Baltiyskaya ul., Moscow, 125315

Nikolay E. Kushlinskii

N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology

Email: biochimia@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-3898-4127

MD, PhD, Professor, Member of Russ. Acad. Sci., Head of Laboratory of Clinical Biochemistry and Laboratorial Diagnostics

Россия, 23 Kashirskoe shosse, Moscow, 115478

References

Supplementary files